使用qPCR检测个体和群居猪只的唾液样品改善猪萎缩性鼻炎的监控
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简介
猪萎缩性鼻炎（AR）由产毒的支气管败血波氏杆菌（Bb）和D型多杀性巴氏杆菌（PMT）引起。AR屠宰前的监控通常经过细菌培养，PCR或鼻拭子（NS）的抗原检测等直接检测[3]。唾液检测（OF）提供了一个可以定期收集蓄群疾病数据的机会，并被评估作为监测猪的各种细菌性和病毒性疾病[4]。据我们所知，目前没有关于使用唾液对商业化的猪场进行支气管败血波氏杆菌（Bb）和D型多杀性巴氏杆菌（PMT）的报道。因此，本研究旨在明确感染Bb和PMT的个体或群居猪只的唾液样品通过qPCR是否能够被检测到。
材料和方法
源自传统PCR检测Bb（flaA基因）和PMT（toxA基因）的两种评估方法被调整为实时模式，即使用荧光染料SYBR Green I检测和溶解曲线分析[1,2]。分别使用参考的Bb和PMT菌株，组合的猪病毒性和细菌性呼吸道病原来评估分析的特异性和敏感性。
大栏样品来自10个生长育肥农场的46个猪栏（20-25头猪，4-16周龄），每栏样品包括一份唾液和一份液体混合4-7个的鼻拭子（每群4-6栏）。个体样品包括唾液和鼻拭子各32份，来自两个相同的成年母猪数的育种妊娠单元。
群体至少一份样品qPCR检测为阳性，才可以被认为是Bb或PMT阳性，视情况而定。
结果
PCR方法成功地被调整到qPCR模式，保留Bb和PMT检测的敏感性和特异性，和猪的其他病原没有交叉反应，可以检测的极限为1-10ufc/ul。
10个生长育肥单元的检测结果，7个为Bb阳性，一个为PMT阳性。两个育种妊娠单元PMT都为阴性，一个为Bb阳性。每个目标和样品种类的qPCR阳性结果在表1总结。所有检测的鼻拭子和唾液样品阳性比例各不相同（没有显示数据）。只有一头母猪的鼻拭子和唾液样品检测都为Bb阳性；所有母猪的PMT检测都为阴性。
表1 来自46个大栏猪只和32头单栏饲养母猪的唾液和鼻拭子的支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的qPCR阳性结果
OF=唾液；NS=鼻拭子；Bb=支气管败血波氏杆菌；PMT=多杀性巴氏杆菌；
1大栏样品同时采自每栏20-25头猪只的大栏：1份唾液和一份液体混合4-7个的鼻拭子。
结论和讨论
本研究证明猪的唾液可能含有Bb和PMT的遗传物质，可以被qPCR检测到。来自个体或群居猪只的唾液和鼻拭子的检出率相近。这些结果提示唾液可被用来检测猪的萎缩性鼻炎，减少采集样品的人力和猪只的应激，提供关于种猪和生长猪的健康状态（关于AR）的有价值信息。
结果同时表明可能大部分的猪只没有Bb的感染，虽然它被认为在猪的呼吸道正常定植。然而，值得注意的是，被检动物的数量较少可能会对结果有影响。不过，这些研究结果鼓励使用上述的方法开展进一步的研究，结合猪群生产数据，寻找唾液Bb和PMT的检出率和发病率的关系。
致谢
Mireia Blanch, Sandra Alonso and Miriam Oria
（西班牙海博莱实验诊断中心）
参考文献
1. Hozbor D et al. 1999. Res. Microbiol. 150: 333?41.
2. Kamp EM et al. 1996. J Vet Diagn Invest 8:304-09.
3. OIE Terrestrial Manual. 2012. Chapter 2.8.2.
4. Prickett JR et al. 2010. Anim Health Res Rev 11:207-16.
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